Endonucleasas que eliminan secuencias 5' del ADN procedentes de una estructura de ADN denominada ADN flap (ADN solapado). Las estructuras del ADN flap aparece cuando un ADN bicatenario contene una rotura en una cadena, de modo que a partir de la posición 5' dicha cadena resulta demasiado larga, solapándose al extremo 3' de la porción proximal. Las endonucleasas flap cortan la porción distal de la estructura flap solapada precisamente después del primer par de bases de nucleótidos, creando una muesca apta para una unión.